Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型乳癌患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出现人躯内自身HIV到出现1型式肾病诊疗病因的困难重重率在成年人时期就有很好的详细描述，多个人躯内自身HIV白血病的成年人之后有70%在肠道转换后10年内患上肾病，而随访15年的成年人这一人口比例减低到84%。比起之下，占诊疗1型式肾病一半以上的型式1型式肾病的肺癌必要还没有取得充分的研究课题。

愈来愈多的人开始可用分期系统来定义1型式肾病的困难重重：个躯在出现多种人躯内自身HIV时进入第1之后，出现血糖异常时进入第2之后，出现病因时进入第3之后。一些多发人躯内自身HIV白血病的个躯，在1期和2期，困难重重较较慢，并持续发展为肺癌的1型式肾病。我们之后详细描述了一个大成员在首次检验到多种人躯内自身HIV样本后至极多10年无肾病的很较慢困难重重者，这组成员病人数目极多，但并不相同之处非常明确。随后，我们发掘出人躯内自身淋巴细胞选择性CD8+T细胞会重排在困难重重缓较慢的病人之后基本不存在，但在近期肺癌和由来已久的肾病病人之后很容易检验到。这可能表明，与困难重重病人比起，这些病人自身免疫重排的调节增强。

之后期研究课题表明，尽管调节性T细胞会(Treg)数目正常，但肾病病人存在一些功能缺陷，其之后有数对IL-2的重排战斗能力增大。此外，肾病病人之后的效不应CD4+T细胞会可能对调节更具抵抗性，展示出为效不应T细胞会的依赖性减弱，自然产生的Treg和躯外产生的可借Treg，以及淋巴细胞漫长的CD4+T细胞会之后IL-2重排减弱。本研究课题的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在海岸边正因如此缓较慢困难重重者之后的并不相同之处，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

法则：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁下述确诊的病人血亲之后安全检查1型式肾病的危险性各种因素。我们之后详细描述了长期缓较慢困难重重者的并不相同之处，他们维持多重人躯内自身HIV白血病至极多10年，但没有出现肾病的诊疗病因，较慢性或非透过性自身免疫。随后，10名独自维持无肾病并情愿有数大量肠道样本的缓较慢困难重重者纳入T和B细胞会功能分析。在目前为止的研究课题之后，8名较慢困难重重者(SP组成员)，之后位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人躯内自身HIV白血病。所有的发起者都处于1型式肾病困难重重的1期，尽管一些人随后保住了人躯内自身HIV对某些淋巴细胞的白血病重排，然而，一名病人已经处于2期至极多6年，但没有出现诊疗病因，一名病人被诊断为肾病，该实验者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之后对该NAD透过了直接分析。分离出来外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多变量流式细胞会术和T细胞会依赖性试验分析NAD之后Treg的基频、环境各种因素式和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类系统地研究、相关联和重回)透过无监督聚类分析，分析Treg环境各种因素式。

结果：与身心健康NAD比起，来自较慢困难重重躯的清醒CD4+T细胞会的监督聚类看出，不应答的清醒CD4+ Treg基频减低，与抑制作用可借的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c升高的病人与困难重重缓较慢者和转换的小鼠成员比起，Treg小曲有所并不相同。功能分析表明，与身心健康NAD比起，来自缓较慢困难重重躯的Treg酪氨酸的CD4+效不应T细胞会依赖性明显受到破坏。展示出为对效不应CD4+T细胞会CD25和CD134隐含的依赖性减低。

左图1 系统地的环境各种因素式分析看出，CD4+Treg共通点式在较慢困难重重函数调用之后减低。由FlowSOM填充的Treg二楼，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标有物隐含系统地研究出10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)可用9个并不相同Treg标有填充的10个元簇的MST。每个路由表都是一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由表组成员附近上色。每个路由表之后的饼左图说明单个标有的隐含级别。(b)每个元聚类的热左图，以看出整躯标有隐含。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)填充左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下同位素为每个metacluster筒线或左图(同位素> 0.05%)具体为HD和SP组成员:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。绿色红色都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 可用CITRUS的预测证实，Treg基频的减低是困难重重缓较慢的标志。分级门控(a - f)和柑桔分析(g-k)比较SP发起者和转换的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的都是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含透过分离出来，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)组成员以及NADSP 606(绿色)之后CD25+ cd127的基频概要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的筒线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度上色，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用之间的并不相同。(j)筒线或左图看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员之后，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比之下同位素(人口比例)。(k)直方左图看出每个簇的环境各种因素式(粉红色)和Treg标有相比之下隐含与背景隐含(金色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇之后标有的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身心健康献血者比起，困难重重缓较慢者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个隐含标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热左图(sp606不有数在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之后所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR隐含串联，看出直方左图(c)和概要左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NAD有数，p< 0.05(金色)NADSP 606和转换的HD不有数在测试之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之后GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)串联，看出直方左图(e)和概要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自缓较慢困难重重的CD4+ treg细胞会控制效不应CD4+T细胞会的战斗能力增大。SP组成员用金色的线或和红色说明，HD组成员用黑色的线或和红色说明，绿色的线或/红色说明NADsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标有为CFSE, Treg按仔细观察的人口比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，培育3当晚透过流式细胞会术检验。(a-d)与CD4+反之亦然者相比之下不应的treg培育(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。可用白血病对照(不应答的响不应细胞会仅有treg)计算依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 效不应CD4+T细胞会对缓较慢困难重重的T细胞会活化的依赖性更敏感。SP组成员用金色的线或和红色说明，HD组成员用黑色的线或和红色说明，绿色的线或/红色说明NADsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标有，treg按仔细观察的人口比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，培育3当晚透过流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培育。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE依赖性前年(b)。(c,d) CD25依赖性前年(c)和CD134依赖性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之后的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们证明了的论断是，来自缓较慢困难重重子的活化清醒CD4+Treg在GITR隐含之后取得了扩张和非常丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型式肾病风险个躯之后的相关联的重要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28