Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型哮喘患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出人基底内自身血液到显现出1型肝炎流行病学病症的令人满意亲率在儿童初期就有很好的所述，多个人基底内自身血液阴性的儿童中所有70%在血液转换后10周内罹患肝炎，而随访15年的儿童这一百分比增高到84%。相比之下，占流行病学1型肝炎一半以上的型1型肝炎的发作有助于还无法获取充分的分析。

日益多的人开始常用分期控制系统来定义1型肝炎的令人满意：有机基底在显现出多种人基底内自身血液时进入第1阶段，显现出血糖诱发时进入第2阶段，显现出病症时进入第3阶段。一些多发人基底内自身血液阴性的有机基底，在1期和2期，令人满意较快，并工业发展为发作的1型肝炎。我们先前所述了组合成成员在首次侦测到多种人基底内自身血液样本后非常不算10年无肝炎的较较慢令人满意者，这组成员病人人数不算，但构造非常明确。随后，我们推测人基底内自身复合物特异性CD8+T细胞会反不应在令人满意平稳的病人中所基本不不存在，但在近期发作和长期不存在的肝炎病人中所很容易侦测到。这也许表明，与令人满意病人相比，这些病人自身免疫反不应的通气增强。

晚期分析表明，尽管通气性T细胞会(Treg)数量但会，但肝炎病人不存在一些功能原因，其中所除此以外对IL-2的反不应能力减小。此外，肝炎病人中所的效不应CD4+T细胞会也许对通气更具抵抗性，基底现为效不应T细胞会的依赖性减弱，自然地显现出的Treg和基底外显现出的诱导Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞会中所IL-2反不应减弱。本分析的用以是所述了CD4+通气性T细胞会(Treg)在大群极平稳令人满意者中所的构造，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

工具：BOX分析是一项以人群为基础的纵向分析，在21岁以下复发的病人亲属中所检查1型肝炎的危险考量。我们先前所述了长期平稳令人满意者的构造，他们依然多重人基底内自身血液阴性最少10年，但无法显现出肝炎的流行病学病症，较慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名一直依然无肝炎并愿意透过大量血液样本的平稳令人满意者纳入T和B细胞会功能分析。在目前的分析中所，8名较慢令人满意者(SP组成员)，中所位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人基底内自身血液阴性。所有的举例来说都属于1型肝炎令人满意的1期，尽管一些人随后失去了人基底内自身血液对某些复合物的阴性反不应，然而，一名病人已经属于2期非常不算6年，但无法显现出流行病学病症，一名病人被复发为肝炎，该测试者72岁，在挖掘科学研究样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在分析中所对该小分子进行时了单独审计。分离出来外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会奥义和T细胞会依赖性检验审计小分子中所Treg的Hz、基因型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、密切相关和回归)进行时无委派聚类分析，审计Treg基因型。

结果：与保健小分子相比，来自较慢令人满意基底的清醒CD4+T细胞会的委派聚类推测，启动时的清醒CD4+ TregHz增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)重申增高有关。一名HbA1c升高的病人与令人满意平稳者和给定的折衷组成员相比，Treg五音有所相同。功能分析表明，与保健小分子相比，来自平稳令人满意基底的Treg介导的CD4+效不应T细胞会依赖性值得注意毁坏。基底现为对效不应CD4+T细胞会CD25和CD134重申的依赖性增高。

上图1 深入的基因型分析推测，CD4+Treg免疫球蛋白在较慢令人满意链表中所增高。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物重申断定出10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;文件控制系统Treg_1;文件控制系统Treg_2;文件控制系统Treg_3;和文件控制系统Treg_4。(a)常用9个相同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个节点代表人一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在节点组成员区域内制做。每个节点中所的甜品上图透露单个上面的重申等级。(b)每个元聚类的热上图，以推测整基底上面重申。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转化成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于同位素为每个metacluster箱子终点站上图(同位素> 0.05%)确认为HD和SP组成员:文件控制系统Treg_2 (e),文件控制系统Treg_3 (f),文件控制系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。深蓝色红色代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 常用CITRUS的估测属实，TregHz的增高是令人满意平稳的标志。国际标准奈斯(a - f)和玉米分析(g-k)非常SP举例来说和给定的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的区别。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表人性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR重申进行时分离出来，建模FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)组成员以及小分子SP 606(深蓝色)中所CD25+ cd127的Hz简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱子终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(文件控制系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件控制系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件控制系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件控制系统T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3重申强度着色，对角突出的簇被识别为SP和HD链表之间的相同。(j)箱子终点站上图推测了在SP(虎纹)和HD(灰点)组成员中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对于同位素(百分比)。(k)直方上图推测每个簇的基因型(粉红色)和Treg上面相对于重申与背景重申(深蓝色);上列，文件控制系统Treg_3;下面一行，文件控制系统Treg_4。背景与所有其他簇中所上面的重申有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

上图3 与保健献血者相比，令人满意平稳者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;文件控制系统Treg_2;文件控制系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个重申上面的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的重申热上图(sp606不除此以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(黄褐色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR重申串联，推测直方上图(c)和简介上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(深蓝色)所有小分子除此以外，p< 0.05(深蓝色)小分子SP 606和给定的HD不除此以外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR重申，从国际标准奈斯，从所有HD(黄褐色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，推测直方上图(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

上图4 来自平稳令人满意的CD4+ treg细胞会压制效不应CD4+T细胞会的能力减小。SP组成员用深蓝色的终点站和红色透露，HD组成员用黑色的终点站和红色透露，深蓝色的终点站/红色透露小分子sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(不反之亦然者)被上面为CFSE, Treg按捕捉到的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置细胞会，培育出3天内进行时流式细胞会奥义侦测。(a-d)与CD4+不反之亦然者相对于不应的treg培育出(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不反之亦然者培育出。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。常用阴性折衷(启动时的响不应细胞会不含treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

上图5 效不应CD4+T细胞会对平稳令人满意的T细胞会重置的依赖性更敏感。SP组成员用深蓝色的终点站和红色透露，HD组成员用黑色的终点站和红色透露，深蓝色的终点站/红色透露小分子sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(不反之亦然者)被cfsel上面，treg按捕捉到的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置细胞会，培育出3天内进行时流式细胞会奥义(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606不反之亦然者共同培育出。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE依赖性百分亲率(b)。(c,d) CD25依赖性百分亲率(c)和CD134依赖性百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中所的重申。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

结论：我们推断的结论是，来自平稳令人满意子的重置清醒CD4+Treg在GITR重申中所获取了扩展和丰富，重申了进一步分析Treg在1型肝炎效用有机基底中所的控制系统性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28