Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病症状进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现去甲自身抗质到浮现1标准型哮喘药理学腹泻的十分困难叛将在老年人时期就有很好的描绘，多个去甲自身抗质HIV的老年人当中有70%在血清切换后10年内患上哮喘，而随访15年的老年人这一人口比例增大到84%。相对于之下，分之一药理学1标准型哮喘一半以上的标准型1标准型哮喘的患病组态还并未得到充分的量化。

越来越多的人开始常用分期系统来假定1标准型哮喘的十分困难：个质在浮现多种去甲自身抗质时进到第1过渡期，浮现血糖间歇性时进到第2过渡期，浮现腹泻时进到第3过渡期。一些多发去甲自身抗质HIV的个质，在1期和2期，十分困难较太快，并发展为患病的1标准型哮喘。我们先前描绘了一第一组在首次检验到多种去甲自身抗质样品后将近10年无哮喘的极太快十分困难者，这第一组病患者人数少，但构造十分恰当。随后，我们发现去甲自身特异性依赖性CD8+T细胞内反不应在十分困难很太快的病患者当中大体上不存在，但在近期患病和长期存在的哮喘病患者当中很非常容易检验到。这可能表明，与十分困难病患者相对于，这些病患者自身免疫反不应的适度增强。

一时期量化表明，尽管适度性T细胞内(Treg)数量正常，但哮喘病患者存在一些功能性缺点，其当中还包括对IL-2的反不应技能减少。此外，哮喘病患者当中的物理现象CD4+T细胞内可能对适度更具抵抗性，展示出为物理现象T细胞内的可抑制消散，共存导致的Treg和质外导致的作用于Treg，以及特异性境遇的CD4+T细胞内当中IL-2反不应消散。本量化的目地是描绘了CD4+适度性T细胞内(Treg)在一小群极很太快十分困难者当中的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX量化是一项以人群结合的横向量化，在21岁以下确诊的病患者亲属当中质子对1标准型哮喘的致命主因。我们先前描绘了长期很太快十分困难者的构造，他们保持一致多重去甲自身抗质HIV超过10年，但并未浮现哮喘的药理学腹泻，太快性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续保持一致无哮喘并愿意提供大量体内样品的很太快十分困难者扩展到T和B细胞内功能性量化。在目前的量化当中，8名太快十分困难者(SP第一组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的去甲自身抗质HIV。所有的自发性都位处1标准型哮喘十分困难的1期，尽管一些人随后失掉了去甲自身抗质对某些特异性的HIV反不应，然而，一名病患者已经位处2期将近6年，但并未浮现药理学腹泻，一名病患者被药理学为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据量化当中对该酪氨酸来进行了除此以外评质子。转化外周血单个质子细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内拳法和T细胞内可抑制试验评质子酪氨酸当中Treg的频叛将、表标准型和功能性。常用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和重回)来进行无监督聚类量化，评质子Treg表标准型。

结果：与身体健康酪氨酸相对于，来自太快十分困难质的心灵CD4+T细胞内的监督聚类表明，激活的心灵CD4+ Treg频叛将增大，与糖皮质激素作用于的TNFR系统性蛋白(GITR)解读增大有关。一名HbA1c上升时的病患者与十分困难很太快者和意味着的对应第一组相对于，Treg谱有所各有不同。功能性新发现，与身体健康酪氨酸相对于，来自很太快十分困难质的Treg激活的CD4+物理现象T细胞内可抑制明显受到破坏。展示出为对物理现象CD4+T细胞内CD25和CD134解读的可抑制增大。

三幅1 侧重的表标准型新发现，CD4+Treg亚标准型在太快十分困难函数调用当中增大。由FlowSOM降解的Treg房，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据记号物解读检验出10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)常用9个各有不同Treg记号降解的10个元簇的MST。每个路由器都是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由器第一组周边上色。每个路由器当中的饼三幅暗示单个记号的解读层次。(b)每个元聚类的热三幅，以表明整质记号解读。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)降解三幅，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于之下质子素为每个metacluster盒1](质子素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。紫色左上方都是捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分第一组符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模标准型确认，Treg频叛将的增大是十分困难很太快的徽章。AO暂时性(a - f)和甜菜量化(g-k)比较SP自发性和意味着的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞内上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的都是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR解读来进行转化，模拟器FlowSOM群质。(b) HD(白斑)和SP(星点)第一组以及酪氨酸SP 606(紫色)当中CD25+ cd127的频叛将汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性长子集的盒1];(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)果树簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度上色，箭头突出的簇被标记为SP和HD函数调用错综复杂的各有不同。(j)盒1]表明了在SP(星点)和HD(灰点)第一组当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对于之下质子素(人口比例)。(k)缩放表明每个簇的表标准型(粉红色)和Treg记号相对于之下解读与氛围解读(红色);上列，CPUTreg_3;前面一行，CPUTreg_4。氛围与所有其他簇当中记号的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分第一组符号秩检验

三幅3 与身体健康献血者相对于，十分困难很太快者心灵treg的GITR增大。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的解读热三幅(sp606不还包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(黄色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR解读相联，表明缩放(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon分第一组符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有酪氨酸还包括，p< 0.05(红色)酪氨酸SP 606和意味着的HD不还包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR解读，从AO暂时性，从所有HD(黄色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)相联，表明缩放(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon分第一组符号秩检验

三幅4 来自很太快十分困难的CD4+ treg细胞内控制物理现象CD4+T细胞内的技能减少。SP第一组用红色的终点站和左上方暗示，HD第一组用灰色的终点站和左上方暗示，紫色的终点站/左上方暗示酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被记号为CFSE, Treg按辨别的人口比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠细胞分裂细胞内，指导3天内来进行流式细胞内拳法检验。(a-d)与CD4+转发者相对于之下不应的treg指导(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者指导。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE可抑制总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制总和。常用HIV对应(激活的响不应细胞内另有treg)计算可抑制总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 物理现象CD4+T细胞内对很太快十分困难的T细胞内细胞分裂的可抑制更敏感。SP第一组用红色的终点站和左上方暗示，HD第一组用灰色的终点站和左上方暗示，紫色的终点站/左上方暗示酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel记号，treg按辨别的人口比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠细胞分裂细胞内，指导3天内来进行流式细胞内拳法(CD25反染)和细胞内因长子量化。HD Treg与HD、SP或sp606转发者携手指导。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE可抑制%-(b)。(c,d) CD25可抑制%-(c)和CD134可抑制%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自很太快十分困难长子的细胞分裂心灵CD4+Treg在GITR解读当中得到了扩张和丰沛，强调了有利于量化Treg在1标准型哮喘效用个质当中的异质性的必要性。

文当中出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28